“当然!活性不能只用一支管子的体积描述,要按照总蛋白量、单位体积活性和单位蛋白活性分别标定。”
“每一批都先要做内毒素检测、无菌检验、支原体筛查和残余核酸检测。粗提液的活性标定仍然先做体外划痕实验,确认它能促进细胞层闭合,再进入动物剂量研究。”
孙汉章把三组动物曲线调出来。
“低、中、高三个剂量梯度,另设阴性对照。对照动物接受同样的清创、包扎和基础处理,只不给粗提液。”
“给药前要把动物品系、年龄、体质量、创面部位和损伤程度对齐。”
“每个嫦娥日同一时段做临床观察,体温、体质量、饮食、精神状态、创面面积、渗出液、结痂、肉芽组织、局部红肿和步态评分,都要记录。创面面积用标准化摄影结合图像分析,步态评分按承重、落地时间和跛行程度分级。”
“低剂量组反应轻,中剂量组愈合最顺,高剂量组局部炎症过强,体温升幅也过大。剂量存在治疗窗,不是越多越好。阴性对照组的创面按常规速度收缩,给药组的闭合率明显提高。”
“还要取组织做病理。不同时间点取皮肤、皮下组织、引流淋巴结和主要脏器,做组织病理学检查,观察炎症细胞浸润、肉芽组织形成、胶原沉积、血管新生和纤维化。”
“以及要做免疫原性检测,看看动物是否产生针对粗提液成分的抗体或细胞免疫反应。生物分布也得查,利用标记物追踪它在创面、血液、肝、肾、脾、肺里的分布和清除。只有局部有效、全身暴露可控、组织病理可接受,才有继续往下走的资格。”
江承把手指停在“spf级动物、剂量梯度、阴性对照、组织病理、免疫原性、生物分布”一行。
“...送出去之前,我还做了活性标定。”孙汉章接着开口。
“把粗提液滴到刚铺好的细胞层上,看它能不能让缺口收拢。标定通过后,才配成待用剂量。”
“这一管我记了三样数,浓缩倍数、活性等级和剩余总蛋白量。以后就算这条线断了一辈子,别人照着这些数据,也能重新制备。药要能传下去,先得能复现。”
“...那活菌和这管东西到底差在哪儿?”
孙汉章敲了敲密封管。
“分寸。”
“……活菌进入活体,行为范围和定植位置都难预测。我取的是它在受控条件下释放出的成分,经过灭活、分离、过滤和浓缩,剂量可测,成分可追踪,风险可管控!”
他调出羊只实验记录。
“.....给药前,我把同批次羊只的损伤条件尽量对齐,同一侧、同一类断伤,病程接近,创口都完成清创和基础处理。低、中、高三组各自接受不同剂量,另留同类损伤的阴性对照。”
“不过,效果出乎意料!”
“第30分钟,给药组开始出现结痂;第48分钟,痂下出现新生肉芽,肉芽颜色和质地逐渐改善;第244分钟,给药母羊自行站起,用原来受损的后肢走到食槽前。对照羊的创口仍反复渗出,承重能力没有恢复。”